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分子篩(凝膠過(guò)濾層析)蛋白純化系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)
分子篩(凝膠過(guò)濾層析)蛋白純化系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)分子篩定義: 分子篩層析,又稱為凝膠過(guò)濾層析或體積排阻層析。分子篩層析是利用有一定孔徑范圍的多孔凝膠作為固定相,對(duì)混合物中各組分按分子大小進(jìn)行分離的層析技術(shù)。具有分子篩作用的物質(zhì)很多,如浮石、瓊脂、瓊脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝膠等。
避開(kāi)原因一:工藝放大困難分子篩層析無(wú)法遵循線性放大原則,即使遵循柱床高度不變的原則,工藝流速如何進(jìn)行調(diào)整,也是需要面臨的問(wèn)題。為保證良好的分離效果,分子篩層析需要求相對(duì)較高的裝填高度,然而裝填高度偏高,反壓也勢(shì)必會(huì)偏高。由于層析填料的耐壓有限,在保證不超壓的前提下,工藝流速會(huì)明顯受限,這會(huì)使得整個(gè)純化過(guò)程時(shí)間漫長(zhǎng)。
避開(kāi)原因二:層析柱裝填困難在進(jìn)行層析柱裝填時(shí),勻漿液濃度需要在一定的范圍內(nèi)(50%-70%),方可保證沉降均勻、柱效良好,這對(duì)層析柱的規(guī)格選型有著特殊要求。高度100 cm的層析柱,在勻漿濃度50%-70%時(shí),假設(shè)壓縮系數(shù)為1.15,則實(shí)際使用高度為43.5-60.9 cm,這往往無(wú)法達(dá)到某些使用者的要求。若選配裝柱器,并考慮柱頭所占空間,這要求實(shí)驗(yàn)空間需高度充足。若考慮將2根層析柱串聯(lián)使用,則要求2根層析柱的柱效相當(dāng),才可保證分離效果良好,這對(duì)裝填技術(shù)也有著較高要求。
避開(kāi)原因三:測(cè)定柱效困難常規(guī)柱效測(cè)定方法,要求平衡1.5-2 CV,進(jìn)樣后,洗脫至出峰(參考值:2 CV),流速30 cm/h。若假設(shè)裝填高度為60 cm,平衡、洗脫體積總計(jì)3.5 CV,經(jīng)計(jì)算,測(cè)定一次柱效,需耗時(shí)7小時(shí)??梢韵胂?,當(dāng)發(fā)現(xiàn)柱效不理想,需要重新裝填并測(cè)定柱效時(shí),過(guò)程是很繁瑣、耗時(shí)的。
避開(kāi)原因四:維護(hù)保養(yǎng)操作困難當(dāng)層析柱使用完畢,用20%乙醇保存時(shí),同樣也很耗時(shí)。而且當(dāng)再次使用時(shí),用水將20%乙醇置換走,一般需要3 CV以上,而且由于該過(guò)程反壓較大,通常還需要降低流速進(jìn)行。
總之,采用分子篩層析,各個(gè)環(huán)節(jié)都很繁瑣、耗時(shí),因此,在進(jìn)行層析工藝設(shè)計(jì)時(shí),要盡量避開(kāi)分子篩層析。