- 所在位置: 首頁
- 技術(shù)文章
- 微量分光光度計原理及應(yīng)用介紹
微量分光光度計原理及應(yīng)用介紹
那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于
微量分光光度計原理及應(yīng)用介紹:
微量分光光度計能夠快速準(zhǔn)確的定量檢測核酸、蛋白質(zhì)等溶液。具有使用方便、消耗樣品少(僅2μl)、不用預(yù)熱、能迅速清理殘留樣品、不需要比色皿或其它樣品定位裝置、樣品不需要稀釋等特點(diǎn),常用于核酸,蛋白定量以及生長濃度的定量,目前已成為眾多實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)儀器。
工作原理
超微量分光光度計進(jìn)行濃度測定的原理是根據(jù)朗伯-比爾(Lamber-Beer)定律,
A=K·C·L
式中,A為吸光度;K為吸(消)光系數(shù);C為溶液的濃度;L為液層厚度。此公式說明:在入射光一定時,溶液的吸光度與溶液的濃度及液層厚度成正比。此式就是光的吸收定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式,又叫朗伯-比爾定律。
核酸定量
核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率高的功能。可以定量測定溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA以及RNA含量。這是由于核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵,具有紫外吸收的特性,大的吸收波長在260nm,吸收波谷在230nm。
除了核酸濃度,分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度,如A260/A280的比值,用于評估樣品的純度,因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?80nm。純凈的樣品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
蛋白質(zhì)直接定量
這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。蛋白質(zhì)直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來說,速度快,操作簡單;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾,如DNA的干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。
比色法蛋白質(zhì)定量
蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的化合物,比色法測定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團(tuán)或者染料反應(yīng),產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān),從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。
比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry 等幾種方法。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于微量分光光度計原理及應(yīng)用介紹。
我們上海金鵬分析儀器有限公司是專業(yè)生產(chǎn)
超微量分光光度計、超微量核酸蛋白測定儀、化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)、
凝膠成像分析系統(tǒng)、紫外分析儀、核酸蛋白檢測儀、紫外檢測儀、蛋白質(zhì)分離純化系統(tǒng)、光化學(xué)反應(yīng)儀、旋渦混合器、恒流泵、自動部分收集器等十幾個系列產(chǎn)品的廠家,歡迎大家前來訂購