那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于超微量分光光度法的定義與應(yīng)用:
定義: 超微量分光光度法是利用物質(zhì)所特有的吸收光譜來(lái)鑒別物質(zhì)或測(cè)定其含量的分析檢測(cè)技術(shù)。
特點(diǎn): 靈敏、快速和簡(jiǎn)便,在復(fù)雜組分系統(tǒng)中,不需要分離,即能檢測(cè)出其中所含的極少量物質(zhì)。
應(yīng)用: 生物化學(xué)研究中廣泛使用的方法之一,廣泛用于糖,蛋白質(zhì),核酸,酶等的快速定量檢測(cè)
超微量分光光度計(jì)的光譜范圍
包括波長(zhǎng)范圍為380~780 nm的可見(jiàn)光區(qū)和波長(zhǎng)范圍為200~380 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其特有的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。
鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的380~820nm波長(zhǎng)的光譜,光通過(guò)三棱鏡折射后,可得到由紅、橙、黃、綠、藍(lán)、靛、紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見(jiàn)光分光光度計(jì)的光源。
氘燈的發(fā)射光譜:氘燈能發(fā)出190~400 nm波長(zhǎng)的光譜,可作為紫外光光度計(jì)的光源。 氙氣閃光燈的發(fā)射光譜:氙燈能發(fā)出200~850 nm波長(zhǎng)的光譜,可作為紫外-可見(jiàn)光光度計(jì)的光源。電源體積較小,采用脈沖閃光方式工作,閃光次數(shù)可達(dá)109次,壽命相對(duì)氘燈和鎢燈較長(zhǎng)。
物質(zhì)的吸收光譜
如果在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液,此時(shí)在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜,它出現(xiàn)了幾條暗線,即光源發(fā)射光譜中某些波長(zhǎng)的光因溶液吸收而消失,這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的吸收光譜。
不同物質(zhì)的吸收光譜是不同的。因此根據(jù)吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質(zhì)。
原理
當(dāng)光線通過(guò)某種物質(zhì)的溶液時(shí),透過(guò)的光的強(qiáng)度減弱。因?yàn)橛幸徊糠止庠谌芤旱谋砻娣瓷浠蚍稚?,一部分光被組成此溶液的物質(zhì)所吸收,只有一部分光可透過(guò)溶液。
入射光 = 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透過(guò)光
如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為“空白”去校正反射、分散等因素造成的入射光的損失,則:
入射光 = 吸收光 十 透過(guò)光
分光光度計(jì)進(jìn)行樣品濃度測(cè)定的原理是根據(jù)朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律,
A = ε b c
其中,A ——為物質(zhì)的吸光度;
ε——為物質(zhì)的吸光系數(shù);
b——為光路長(zhǎng)度(光程);
c——為物質(zhì)的濃度。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于超微量分光光度法的定義與應(yīng)用。
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