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技術(shù)文章

薄層色譜法(一)

那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于薄層色譜法(一):
薄層色譜法(TLC),系將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上,成一均勻薄層。待點(diǎn)樣、展開后,根據(jù)比移值(Rf)與適宜的對(duì)照物按同法所得的色譜圖的比移值(Rf)作對(duì)比,用以進(jìn)行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定的方法。薄層色譜法是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù),也用于跟蹤反應(yīng)進(jìn)程。
簡(jiǎn)介
薄層色譜,或稱薄層層析(thin-layer chromatography),是以涂布于支持板上的支持物作為固定相,以合適的溶劑為流動(dòng)相,對(duì)混合樣品進(jìn)行分離、鑒定和定量的一種層析分離技術(shù)。這是一種快速分離諸如脂肪酸、類固醇、氨基酸、核苷酸、生物堿及其他多種物質(zhì)的特別有效的層析方法,從50年代發(fā)展起來至今,仍被廣泛采用。
基本原理
薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法,它利用各成分對(duì)同一吸附劑吸附能力不同,使在移動(dòng)相(溶劑)流過固定相(吸附劑)的過程中,連續(xù)的產(chǎn)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附,從而達(dá)到各成分的互相分離的目的。
薄層層析可根據(jù)作為固定相的支持物不同,分為薄層吸附層析(吸附劑)、薄層分配層析(纖維素)、薄層離子交換層析(離子交換劑)、薄層凝膠層析(分子篩凝膠)等。一般實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用較多的是以吸附劑為固定相的薄層吸附層析。
吸附是表面的一個(gè)重要性質(zhì)。任何兩個(gè)相都可以形成表面,吸附就是其中一個(gè)相的物質(zhì)或溶解于其中的溶質(zhì)在此表面上的密集現(xiàn)象。在固體與氣體之間、固體與液體之間、吸附液體與氣體之間的表面上,都可能發(fā)生吸附現(xiàn)象。
物質(zhì)分子之所以能在固體表面停留,這是因?yàn)楣腆w表面的分子(離子或原子)和固體內(nèi)部分子所受的吸引力不相等。在固體內(nèi)部,分子之間相互作用的力是對(duì)稱的,其力場(chǎng)互相抵消。而處于固體表面的分子所受的力是不對(duì)稱的,向內(nèi)的一面受到固體內(nèi)部分子的作用力大,而表面層所受的作用力小,因而氣體或溶質(zhì)分子在運(yùn)動(dòng)中遇到固體表面時(shí)受到這種剩余力的影響,就會(huì)被吸引而停留下來。吸附過程是可逆的,被吸附物在一定條件下可以解吸出來。在單位時(shí)間內(nèi)被吸附于吸附劑的某一表面積上的分子和同一單位時(shí)間內(nèi)離開此表面的分子之間可以建立動(dòng)態(tài)平衡,稱為吸附平衡。吸附層析過程就是不斷地產(chǎn)生平衡與不平衡、吸附與解吸的動(dòng)態(tài)平衡過程。
例如用硅膠和氧化鋁作支持劑,其主要原理是吸附力與分配系數(shù)的不同,使混合物得以分離。當(dāng)溶劑沿著吸附劑移動(dòng)時(shí),帶著樣品中的各組分一起移動(dòng),同時(shí)發(fā)生連續(xù)吸附與解吸作用以及反復(fù)分配作用。由于各組分在溶劑中的溶解度不同,以及吸附劑對(duì)它們的吸附能力的差異,*終將混合物分離成一系列斑點(diǎn)。如作為標(biāo)準(zhǔn)的化合物在層析薄板上一起展開,則可以根據(jù)這些已知化合物的Rf值(后面介紹Rf值)對(duì)各斑點(diǎn)的組分進(jìn)行鑒定,同時(shí)也可以進(jìn)一步采用某些方法加以定量。
遷移值
薄層層析硅膠Rf=溶質(zhì)移動(dòng)的距離/溶液移動(dòng)的距離。表示物質(zhì)移動(dòng)的相對(duì)距離。
各種物質(zhì)的Rf 隨要分離化合物的結(jié)構(gòu),濾紙或薄層板的種類、溶劑、溫度等不同而不同,但在條件固定的情況下,Rf對(duì)每一種化合物來說是一個(gè)特定數(shù)值。
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