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蛋白層析系統(tǒng)操作步驟及注意事項(xiàng)
蛋白層析系統(tǒng)是一種常用的分離和純化蛋白質(zhì)的方法,操作步驟及注意事項(xiàng)如下:
操作步驟:
- 準(zhǔn)備工作:準(zhǔn)備好所需的層析柱、層析緩沖液、蛋白樣品、洗滌緩沖液、洗脫緩沖液等試劑和設(shè)備。
- 樣品加載:將蛋白樣品加載到層析柱中,注意樣品加載量不要過(guò)多,以避免超載。
- 洗滌:使用洗滌緩沖液洗脫非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì),保持洗滌液的流速穩(wěn)定。
- 洗脫:使用洗脫緩沖液逐步洗脫目標(biāo)蛋白質(zhì),收集洗脫液中的目標(biāo)蛋白質(zhì)。
- 收集:收集洗脫液中的目標(biāo)蛋白質(zhì),注意避免交叉污染和樣品損失。
- 分析:對(duì)收集的目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行分析,如SDS-PAGE凝膠電泳、Western blot等。
注意事項(xiàng):
- 保持實(shí)驗(yàn)環(huán)境清潔整潔,避免交叉污染。
- 嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行,避免操作失誤。
- 注意層析柱的使用壽命和保養(yǎng),及時(shí)更換老化的層析柱。
- 注意控制洗滌和洗脫緩沖液的pH值和離子強(qiáng)度,以保證蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。
- 注意避免氣泡的產(chǎn)生,以保證流速的穩(wěn)定性。
- 注意收集的目標(biāo)蛋白質(zhì)的保存條件,避免蛋白質(zhì)降解或失活。