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電泳帶型分析

那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于電泳帶型分析:
DNA電泳需要進行帶型分析,在實驗過程中常會發(fā)現(xiàn)所得的帶型出現(xiàn)在這樣那樣的問題。在此,我們對DNA帶型做了相應(yīng)的分析。
 
帶型 原因分析 解決辦法
弱帶或無帶 上樣的DNA量不夠 增加DNA的上樣量,聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂糖電泳靈敏度稍高
DNA降解 避免DNA的核酸酶污染
電泳時間過長,DNA跑出 減短電泳時間,降低電壓,增強凝膠濃度
EB染色的DNA,紫外光源不合適 應(yīng)用短波長(254nm),增強紫外燈靈敏度
DNA帶缺失 小DNA帶走出凝膠 減短電泳時間,降低電壓,增強凝膠濃度
分子大小相近的DNA帶不易分辨 增加電泳時間,核準正確的凝膠濃度
DNA 變性 電泳前請勿高溫加熱DNA鏈,以20mM NaCl Buffer稀釋DNA
巨大DNA鏈,凝膠電泳不合適 在脈沖凝膠電泳上分析
DNA帶模糊 DNA降解 避免核酸酶污染
DNA上樣量過多 減少凝膠中DNA上樣量
所用電泳條件不合適 電泳時電壓不應(yīng)超過20V/cm,溫度<30℃,巨大DNA鏈,溫度應(yīng)<15℃,核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力
DNA樣含鹽過高 電泳前通過乙醇沉淀去除過多的鹽
有蛋白污染 電泳前酚抽提去除蛋白
DNA變性 電泳前勿加熱,用20mM NaCl緩沖液稀釋DNA
不規(guī)則DNA帶遷移 對于λ/Hind III片段COS位點復(fù)性 電泳前加熱DNA 65℃加熱5-10分鐘,然后在冰上冷卻5分鐘
電泳條件不合適 電泳電壓不超過20V/cm,溫度<30℃,電泳緩沖液有足夠的緩沖能力
DNA變性 以20mM NaCl Buffer稀釋DNA,電泳前勿加熱
 
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于電泳帶型分析。
 
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