那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于電泳Marker問題集錦:
Q:為什么marker條帶非常模糊,無(wú)法辨別具體條帶?
A:出現(xiàn)上述情況,可能有以下幾個(gè)原因:
1. marker條帶出現(xiàn)了降解。請(qǐng)確保在使用過(guò)程中避免核酸酶污染;
2. 電泳緩沖液陳舊。電泳緩沖液多次使用后,離子濃度降低,pH值上升,緩沖能力減弱,從而影響電泳效果,建議經(jīng)常更換電泳緩沖液;
3. 電泳條件不合適。電泳時(shí)電壓應(yīng)不超過(guò)20V/cm,溫度應(yīng)低于30℃;
4. marker上樣量過(guò)多。請(qǐng)根據(jù)說(shuō)明書選用合適上樣量;
5. 凝膠質(zhì)量不好。建議使用質(zhì)量較好的瓊脂糖;此外,凝膠凝固不均勻也會(huì)導(dǎo)致條帶模糊。
Q:為什么marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則的條帶(如啞鈴狀等)?
A:出現(xiàn)上述情況,多與以下幾個(gè)原因有關(guān):
1. 電泳緩沖液陳舊。老化的電泳緩沖液離子濃度降低,pH值上升,緩沖能力減弱,從而影響電泳效果,建議經(jīng)常更換電泳緩沖液;
2. 電泳條件不合適。電泳時(shí)電壓應(yīng)不超過(guò)20V/cm,電壓太高可能也會(huì)導(dǎo)致marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則現(xiàn)象。此外,凝膠質(zhì)量差以及凝膠冷卻時(shí)凝固不均勻也會(huì)導(dǎo)致該現(xiàn)象出現(xiàn)。
Q:為什么marker條帶非常弱或者根本沒有條帶?
A:出現(xiàn)上述情況可能是:
1. marker上樣量較低,可適當(dāng)增加上樣量;
2. 凝膠質(zhì)量較差或凝膠凝固不均勻也會(huì)導(dǎo)致電泳條帶弱或根本沒有條帶;
3. 電泳時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致marker條帶跑出凝膠,可縮短電泳時(shí)間,降低電壓,增加凝膠濃度。
Q:為什么marker缺帶?
A:對(duì)于含有較小片段的marker,如果出現(xiàn)缺帶現(xiàn)象,可能是因?yàn)椋?br />1.小條帶跑出凝膠或分子量大小非常相近的條帶不易辨認(rèn)所致,可適當(dāng)縮短電泳時(shí)間,降低電壓,同時(shí)增加凝膠濃度;
2.凝膠中EB含量過(guò)低,導(dǎo)致大片段結(jié)合EB量太少或沒有,在紫外光下亮度太低,可適當(dāng)增加EB用量。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于電泳Marker問題集錦。
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